SILAC（stable-isotope labelling by amino acids in cell culture）技术，指利用含轻、中或重型同位素标记的必需氨基酸（主要是Lys和Arg）培养基培养多组细胞，标记细胞内新合成的蛋白质，一般培养5-6代，细胞中的蛋白质将都被同位素标记。比如A组和B组，A组是在包含正常氨基酸（light）的培养基中；B组的培养基则含有“重型（heavy）”的氨基酸,即稳定同位素标记的氨基酸。细胞5-6代后，稳定同位素标记的氨基酸完全掺入到蛋白中，取代了原有的氨基酸，这样，两个蛋白之间就存在分子量的改变，而其它化学性质无异。然后将两组细胞混合，提取出蛋白质，质谱进行测定。通过比较质谱图中肽段信号峰的峰面积大小进行相对定量研究。该技术适用于细胞和动物的体内标记，具有系统误差小，定量准确，并且可以进一步寻找具有时效性变化的差异蛋白，更精准地研究刺激的作用机理等技术特点。
细胞实验流程
动物实验流程
技术平台
Triple TOF 5600, Q-Exactive, Orbitrap Fusion™ Tribrid™
技术优势
高通量：可同时鉴定并定量数百至数千种蛋白质；
定量精确：降低由于样品制备不同而造成的实验差异；
线性定量范围广；
灵敏度更高：蛋白质需要量明显减少；
重要的的体内标记技术，更接近样品真实状态，适用于培养细胞或者小鼠蛋白质表达动态变化研究。
应用领域
机理和调控机制研究
动态过程中机制研究
疾病标志物的筛选
用药及预后标志物筛选
生信分析
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样品类型 |
样品要求（/组样品） |
备注 |
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蛋白质溶液 |
蛋白质总量≥300µg |
重复实验则量翻倍,建议准备两份样品备用。 |
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组织样品 |
样品总量≥0。1g |
按照蛋白质组织提取效率（蛋白：组织=7%） |
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细胞样品 |
细胞数量≥107个 |
胰酶消化，按细胞冻存标准离心收集细胞即可。 |
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体液样品 |
血清≥200µL，脑脊液≥200µL，尿液≥1mL ,泪液≥1mL。 |
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案例：细胞信号通路中T细胞精氨酸甲基化的变化差异
本文研究精氨酸甲基化在免疫调节中的作用,通过异甲硫氨酸甲酯的SILAC培养基培养人T细胞进行实验，共鉴定到了1257个看家蛋白质的2502个精氨酸甲基化位点，发现精氨酸甲基化转移酶在T细胞活化和分化过程中起到了关键作用。
参考文献：
Geoghegan, V., et al. (2015) Comprehensive identification of arginine methylation in primary T cells reveals regulatory roles in cell signalling. Nature communications 6, 6758.
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